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RIPA裂解液

• 型   號│₪↟：
• 價   格│₪↟：280
• 更新時間│₪↟：2021-06-09
• 廠家性質│₪↟：經銷商

我們生產的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液│◕↟。裂解得到的蛋白樣品可以用於常規的Western₪☁·₪✘、IP等│◕↟。

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  我們生產的RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統的細胞組織快速裂解液│◕↟。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用於常規的Western₪☁·₪✘、IP等│◕↟。
  RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay│◕↟。RIPA裂解液的配方有很多種╃▩╃，根據其裂解液的強度大致可以分為強₪☁·₪✘、中₪☁·₪✘、弱三類│◕↟。關於不同的RIPA裂解液以及我們生產的其它裂解液的主要特點和差異╃▩╃，以及如何選擇裂解液可參考附錄│◕↟。
  RIPA裂解液（強中弱套裝）含有RIPA裂解液（強）₪☁·₪✘、RIPA裂解液（中）和RIPA裂解液（弱）各50ml╃▩╃，便於實驗時探索不同的實驗條件│◕↟。
  用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品╃▩╃，可以用我們生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度│◕↟。由於含有較高濃度的去垢劑╃▩╃，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度.
包裝清單│₪↟：

儲存條件│₪↟：
  -20℃儲存╃▩╃，一年有效│◕↟。
注意事項│₪↟：
  為取得*的使用效果╃▩╃，儘量避免過多的反覆凍融│◕↟。可以適當分裝後使用│◕↟。
  裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行│◕↟。
  關於裂解液的選擇╃▩╃，一方面可以參考我們生產的各種裂解液主要特點₪☁·₪✘、差異╃▩╃，選擇合適的裂解液；另一方面也需要透過一些預實驗來摸索*的適合您實驗條件的裂解液│◕↟。
  為了您的安全和健康╃▩╃，請穿實驗服並戴一次性手套操作│◕↟。

使用說明│₪↟：
對於培養細胞樣品│₪↟：
1.融解RIPA裂解液╃▩╃，混勻│◕↟。取適當量的裂解液╃▩╃，在使用前數分鐘內加入PMSF╃▩╃，使PMSF的zui終濃度為1mM│◕↟。
2.對於貼壁細胞│₪↟：去除培養液╃▩╃，用PBS₪☁·₪✘、生理鹽水或無血清培養液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾╃▩╃，可以不洗）│◕↟。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液│◕↟。用槍吹打數下╃▩╃，使裂解液和細胞充分接觸│◕↟。通常裂解液接觸細胞1-2秒後╃▩╃，細胞就會被裂解│◕↟。
  對於懸浮細胞│₪↟：離心收集細胞╃▩╃，用手指把細胞用力彈散│◕↟。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液│◕↟。再用手指輕彈以充分裂解細胞│◕↟。充分裂解後應沒有明顯的細胞沉澱│◕↟。如果細胞量較多╃▩╃，必需分裝成50-100萬細胞/管╃▩╃，然後再裂解│◕↟。
3.充分裂解後╃▩╃，10000-14000g離心3-5分鐘╃▩╃，取上清╃▩╃，即可進行後續的PAGE₪☁·₪✘、Western和免疫沉澱等操作│◕↟。
  裂解液用量說明│₪↟：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠╃▩╃，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升│◕↟。
對於組織樣品│₪↟：
1.把組織剪下成細小的碎片│◕↟。
2.融解RIPA裂解液╃▩╃，混勻│◕↟。取適當量的裂解液╃▩╃，在使用前數分鐘內加入PMSF╃▩╃，使PMSF的zui終濃度為1mM│◕↟。
3.按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液│◕↟。（如果裂解不充分可以適當新增更多的裂解液╃▩╃，如果需要高濃度的蛋白樣品╃▩╃，可以適當減少裂解液的用量│◕↟。）
4.用玻璃勻漿器勻漿╃▩╃，直至充分裂解│◕↟。
5.充分裂解後╃▩╃，10000-14000g離心3-5分鐘╃▩╃，取上清╃▩╃，即可進行後續的PAGE₪☁·₪✘、Western和免疫沉澱等操作│◕↟。
6.如果組織樣品本身非常細小╃▩╃，可以適當剪下後直接加入裂解液裂解╃▩╃，透過強烈vortex使樣品裂解充分│◕↟。然後同樣離心取上清╃▩╃，用於後續實驗│◕↟。直接裂解的優點是比較方便╃▩╃，不必使用勻漿器╃▩╃，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分│◕↟。
注│₪↟：RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物╃▩╃，屬正常現象│◕↟。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的複合物│◕↟。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下╃▩╃，可以直接離心取上清用於後續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白╃▩╃，則可以透過超聲處理打碎打散該透明膠狀物╃▩╃，隨後離心取上清用於後續實驗│◕↟。如果檢測一些常見的轉錄因子╃▩╃，例如NFκB₪☁·₪✘、p53等時╃▩╃，通常不必進行超聲處理╃▩╃，就可以檢測到這些轉錄因子│◕↟。

附│₪↟：我們生產的各種裂解液主要特點₪☁·₪✘、差異和選擇
首先請參考下表╃▩╃，瞭解各種裂解液的主要特點和差異│◕↟。

  用於普通的Western₪☁·₪✘、IP或co-IP╃▩╃，我們推薦使用Western及IP細胞裂解液（P0907）╃▩╃，該裂解液已被國內各大研究機構廣泛使用╃▩╃，使用者普遍反映很好│◕↟。裂解細胞或組織後╃▩╃，沒有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成╃▩╃，不必採用超聲處理等就可以非常理想地用於後續操作│◕↟。另外該裂解液裂解的產物也適合用於磷酸化蛋白的Western檢測│◕↟。
  對於某些特殊蛋白的IP╃▩╃，如果發現Western及IP細胞裂解液（P0907）效果不是非常理想╃▩╃，可以嘗試用RIPA裂解液（強₪☁·₪✘、中或弱）或NP-40裂解液│◕↟。如果發現IP的時候背景很高╃▩╃，即非特異的蛋白也被IP下來╃▩╃，則需要選用裂解強度較高的裂解液╃▩╃，例如RIPA裂解液（強或中）│◕↟。如果發現目的蛋白無法被IP下來╃▩╃，則說明裂解液的強度過強╃▩╃，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液（弱）或NP-40裂解液│◕↟。
  對於某些難溶解蛋白的Western╃▩╃，如果發現Western及IP細胞裂解液（P0907）效果不是非常理想╃▩╃，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液（強₪☁·₪✘、中）或SDS裂解液│◕↟。